ANIELLO SCALA¹, CECILIA COMPARINI¹, STEFANIA TEGLI¹, ALESSANDRO RAGAZZI¹, IRENE DELLAVALLE², LORENZO MITTEMPERGHER² and CORRADO LAGAZIO³.
¹Istituto di Patologia e Zoologia Forestale ed Agraria, Università di Firenze, P.le delle Cascine, 28, I-50144 Firenze;
²Centro di Studio per la Patologia delle Specie Legnose Montane, CNR, P.le delle Cascine, 28, I-50144 Firenze;
³Dipartimento di Statistica "Giuseppe Parenti", Università di Firenze, V.le Morgagni, 59, I-50134 Firenze.

The growth of Ophiostoma ulmi and O. novo-ulmi EAN and NAN races on callus cultures from Ulmus carpinifolia and U. pumila at 21, 25 and 33 °C were investigated and compared with the degree of compatibility of in vivo fungus-whole plant interactions and with fungal growth rates on a range of agar media at 21, 25 and 33 °C. No correlation was found between fungal growth on callus cultures, whole plant compatibility or incompatibility, and growth in the agar media, at any of the test temperatures. Mycelium of the isolates H328 of EAN O. novo-ulmi and E2 of O. ulmi showed intercellular growth and caused plasmolysis and necrosis of cells of both Ulmus species, although histological examination revealed that calli of U. carpinifolia suffered greater damage.
Key words: Ophiostoma novo-ulmi, Ophiostoma ulmi, Ulmus spp., Callus cultures.

Analisi in vitro dell’interazione tra Olmo e Ophiostoma ulmi o O. novo-ulmi.

La crescita di Ophiostoma ulmi e O. novo-ulmi razze EAN e NAN su colture di callo derivate da piante di Ulmus carpinifolia e di U. pumila a 21, 25 e 33 °C è stata investigata e comparata con i livelli di compatibilità o di incompatibilità ottenuti in vivo nelle interazioni fungo-pianta intera e con i livelli di crescita fungina su alcuni substrati nutritivi agarizzati. Non è stata trovata correlazione tra crescita fungina sulle colture di callo, le risposte compatibili o incompatibili delle piante intere, e crescita sui substrati nutritivi agarizzati a tutte le temperature utilizzate. Il micelio dell’isolato H328 di O. novo-ulmi razza EAN e dell’isolato E2 di O. ulmi mostrava crescita intercellulare e causava plasmolisi e necrosi delle cellule di entrambe le specie di Olmo; l’esame istologico rivelava che le cellule dei calli di U. carpinifolia soffrivano un danno maggiore.
Parole chiave: Ophiostoma novo-ulmi, Ophiostoma ulmi, Ulmus spp., Colture di callo.

ROBERTA ROBERTI¹, PAOLO FLORI¹ and ANNAMARIA PISI².
¹Dipartimento di Protezione e Valorizzazione Agroalimentare, Sezione di Fitoiatria, Università di Bologna;
²Istituto di Patologia Vegetale, Università di Bologna, Via Filippo Re, 8, I-40126 Bologna.

The activity of selected strains of three species of Trichoderma (T. viride 117, T. harzianum 74 and Trichoderma sp. 6A) on string bean root rot caused by Sclerotium rolfsii Sacc. in vivo (greenhouse and field) and in vitro has been studied. These strains were found to be active in reducing bean root rot, ensuring a control of S. rolfsii when applied to seeds. The non-volatile metabolites released by T. viride 117 in agar avoided completely the growth of S. rolfsii, while those released by T. harzianum 74 and Trichoderma sp. 6A reduced only its growth. Scanning electron microscopy (SEM) investigation confirmed the data obtained on the plants. T. harzianum 74, T. viride 117 and Trichoderma sp. 6A parasitized S. rolfsii hyphae by direct contact, forming coils and hook contact branches. It has also been noticed that T. harzianum 74 when interacts with S. rolfsii produces a fibrillar-like material in higher concentration than T. viride 117. SEM facilitates the study of the interaction sites between Trichoderma and S. rolfsii hyphae.
Key words: Biological control, S. rolfsii, Trichoderma spp., Mechanisms of action.

Lotta biologica contro il marciume radicale del fagiolo causato da Sclerotium rolfsii mediante trattamento dei semi con specie di Trichoderma.

È stata studiata l’attività di tre ceppi selezionati di Trichoderma spp. (T. viride 117, T. harzianum 74 e Trichoderma sp. 6A) contro il marciume radicale di piante di fagiolo causato da S. rolfsii Sacc. in serra, in campo ed in vitro. Questi ceppi, applicati per concia sui semi, sono risultati attivi nel ridurre il marciume radicale del fagiolo. I metaboliti non volatili prodotti da T. viride 117 in agar hanno impedito completamente la crescita di S. rolfsii, mentre quelli prodotti da T. harzianum 74 e Trichoderma sp. 6A ne hanno solo ridotto la crescita. La microscopia elettronica a scansione (SEM) ha confermato i risultati ottenuti sulle piante. T. harzianum 74, T. viride 117 e Trichoderma sp. 6A hanno mostrato di parassitizzare le ife di S. rolfsii mediante un diretto contatto con avvolgimenti (coils) e ramificazioni a tenaglia (hooks). È stato anche notato che quando T. harzianum 74 interagiva con S. rolfsii produceva materiale fibrillare in quantità maggiore di T. viride 117. Il SEM ha facilitato lo studio dell’interazione tra le ife di Trichoderma e quelle di S. rolfsii.
Parole chiave: Lotta biologica, S. rolfsii, Trichoderma spp., Meccanismi d’azione.

GIANCARLO POLIZZI¹ and ANTONINO AZZARO².
¹Istituto di Difesa delle Piante, Università degli Studi di Reggio Calabria, P.zza San Francesco di Sales, 2, I-89061 Gallina, Reggio Calabria;
²Ara Servizi per l’Agricoltura, Via Ammiraglio Caracciolo, 96, I-95123 Catania.

The presence of leaf spots and severe defoliation on myrtle grown in an ornamental plant nursery in southern Italy are reported. The causal agent of the disease was identified as Cylindrocladium scoparium. Successful pathogenicity tests with this organism were carried out. Natural field infections started at the end of summer and were favoured by high temperature and humidity. Nursery trial using three foliar sprays of copper oxychloride (0.9 g/l) achieved good control of the disease while benomyl (0.5 g/l), chlorothalonil (1.02 ml/l), dithianon (0.75 g/l), prochloraz (0.5 g/l) and ziram (1.35 g/l) were ineffective. We believe it is the first report of this fungus in Italy.
Key words: Myrtle, Cylindrocladium scoparium, Chemical control.

Una maculatura fogliare del mirto causata da Cylindrocladium scoparium e prove di lotta in vivaio.

Vengono segnalate macchie fogliari e gravi defogliazioni su piante di mirto coltivate in vivaio nell’Italia meridionale. Cylindrocladium scoparium è stato identificato come agente causale della malattia. Le prove di infezione artificiale hanno confermato la patogenicità del fungo. Le infezioni naturali, rilevabili sin dalla fine dell’estate, sono favorite da temperatura e umidità elevate. Trattamenti fogliari con ossicloruro di rame (0,9 g/l) hanno efficacemente contenuto lo sviluppo della malattia. Di contro, fungicidi contenenti benomyl (0,5 g/l), chlorothalonil (1,02 ml/l), dithianon (0,75 g/l), prochloraz (0,5 g/l) e ziram (1,35 g/l) sono risultati inefficaci. Per quanto è a nostra conoscenza, questa è la prima segnalazione della presenza del fungo in Italia.
Parole chiave: Mirto, Cylindrocladium scoparium, Lotta chimica.

CARMINE MARCONE and ANTONIO RAGOZZINO
Istituto di Patologia Vegetale, Università di Napoli "Federico II", Via Università, 100, I-80055 Portici (Napoli).

Ultrastructural aspects of several genetically different phytoplasmas infecting herbaceous plants, shrubs, forest trees and fruit trees, were studied using scanning electron microscope observations. The identification of phytoplasmas was based on the presence of polymorphic bodies such as budding, spherical, dimpled- and dumbell-shaped structures, and filamentous branching forms which were present only in the sieve tube elements of infected plants, attached to the inner surface of cytoplasma membrane. The study showed that the morphological variations observed most probably represented various developmental stages of phytoplasmas. However they cannot be considered as distinctive characteristics of different phytoplasmas. On the other hand, attachment of phytoplasmas to the host membrane may be an important requirement for pathogenecity as demonstrated for many human and animal pathogenic mollicutes.
Key word: Phytoplasma, SEM, Diagnosis.

Studi ultrastrutturali comparativi di fitoplasmi geneticamente differenti mediante l’impiego della microscopia elettronica a scansione.

Aspetti ultrastrutturali di fitoplasmi appartenenti a differenti gruppi genetici e rinvenuti su piante erbacee, arbustive, piante da frutto e forestali sono stati studiati mediante l’impiego della microscopia elettronica a scansione. L’identificazione di tali procarioti si è basata sulla presenza di forme polimorfiche in fase di divisione quali forme gemmanti, forme soggette a divisione binaria, forme filamentose spesso ramificate e altre ancora mostranti increspature o invaginazioni della superficie esterna. Tali forme sono risultate presenti soltanto negli elementi cribrosi delle piante infette e aderenti alla membrana plasmatica. Le differenze morfologiche riscontrate molto probabilmente rappresentano diversi stadi di sviluppo dei fitoplasmi e quindi non possono essere considerate come caratteristiche distintive degli stessi. L’aderenza dei fitoplasmi al plasmalemma della pianta ospite può essere una condizione indispensabile affinchè si abbia azione patogenetica, analogamente a quanto si verifica per i micoplasmi patogeni dell’uomo e degli animali.
Parole chiave: Fitoplasmi, SEM, Diagnosi.

CESARE MOSCONI¹, PAOLA CRINO'¹, FRANCESCO SACCARDO² and K. B. SINGH^3
1ENEA C.R. Casaccia, Divisione Biotecnologie e Agricoltura, Via Anguillarese, 301, I-00060 Roma;
²Università della Tuscia, Dipartimento Produzione Vegetale, Via S. C. De Lellis, 1, I-01100 Viterbo;
³ICARDA, Germplasm Program, P.O. Box 5466, Aleppo, Syria.

Ascochyta blight caused by Ascochyta rabiei (Pass.) Labr. is the major disease of chickpea (Cicer arietinum L.) in the Mediterranean basin (including Italy), India, Pakistan and North America. Resistant cultivars represent the best way to control the disease. One of the bottlenecks in cultivar development is the lack of a fast screening technique to differentiate between plants/lines which are resistant and susceptible to Ascochyta blight. In an attempt to develop such a technique, crude culture filtrate of A. rabiei was tested, which is phytotoxic on chickpea cuttings, inhibits root elongation from germinating seeds and causes ion leakage. The reaction caused by culture filtrate on chickpea cuttings of susceptible genotypes showed some traits similar to Ascochyta blight symptoms. Different effects were observed on genotypes which were resistant or susceptible to the disease. Differential reaction was also observed when culture filtrate was produced by different pathogenic groups of Italian Ascochyta isolates. While additional research is still required, culture filtrate holds promise as a screening technique for chickpea resistance to Ascochyta blight.
Key words: Cicer arietinum, Ascochyta rabiei, Toxins, Selection, Resistance.

Effetto del filtrato colturale di Ascochyta rabiei su genotipi di cece.

La rabbia causata da Ascochyta rabiei (Pass.) Labr. è uno dei maggiori fattori limitanti la produzione del cece (Cicer arietinum L.) nel bacino del Mediterraneo (compresa l’Italia) oltre che in India, Pakistan e Nord America. L’impiego di cultivar resistenti rappresenta il metodo più efficace per il controllo della malattia. Tra le difficoltà che maggiormente si incontrano nello sviluppo di varietà resistenti è da considerare la mancanza di una tecnica di selezione rapida per differenziare piante e linee resistenti e suscettibili alla rabbia. Nel tentativo di mettere a punto una metodologia di selezione che risponda a questi requisiti, è stato studiato l’effetto del filtrato colturale di A. rabiei su cece. Questo si è rivelato tossico su piantine recise, inibisce l’allungamento radicale di semi in germinazione e causa perdita di elettroliti da foglioline. Il trattamento con filtrato culturale di piantine recise di genotipi suscettibili al fungo ha mostrato una sintomatologia simile a quella causata dalla malattia. Il filtrato colturale di A. rabiei è in grado inoltre di causare effetti diversi su genotipi di cece resistenti e suscettibili al patogeno e tali reazioni differenziali sono state anche confermate quando è stato prodotto da isolati appartenenti ai diversi gruppi patogenici italiani. Anche se sono ancora necessari ulteriori studi, la metodologia basata sull’impiego di filtrato colturale di A. rabiei sembra promettente per selezionare resistenza genetica alla rabbia in cece.
Parole chiave: Cicer arietinum, Ascochyta rabiei, Tossine, Selezione, Resistenza.

CARMINE MARCONE¹, ANTONIO RAGOZZINO¹, PAOLA DEL SERRONE², BERNARDO ALOJ¹, MARINA BARBA² and ERICH SEEMULLER^3
1Istituto di Patologia Vegetale, Università degli Studi di Napoli ‘Federico II’, Via Università, 100, I-80055 Portici (Napoli);
²Istituto Sperimentale per la Patologia Vegetale, Via Bertero, 22, I-00156, Roma;
³Biologische Bundesanstalt für Land- und Forstwirtschaft, Institut für Pflanzenschutz im Obstbau, Schwabenheimer Strasse 101, D-69216 Dossenheim

Apple trees showing proliferation symptoms and pear trees showing pear decline symptoms were sampled in southern Italy and examined by polymerase chain reaction amplification (PCR) and restriction site analysis of the PCR products. The apple proliferation and pear decline phytoplasmas were detected in all samples from symptomatic apple trees and most samples from diseased pears, respectively. This is the first report on the occurrence of these phytoplasmas in southern Italy.
Key words: Apple proliferation, Pear decline, PCR, Ribosomal DNA.

Individuazione degli agenti della proliferazione del melo e della moria del pero nell’Italia meridionale.

Piante di melo e di pero mostranti sintomi di proliferazione e di moria rispettivamente, sono state campionate in Italia meridionale ed esaminate mediante la reazione a catena della polimerasi (PCR) e l’analisi del polimorfismo della lunghezza dei frammenti di restrizione (RFLP). Fitoplasmi responsabili della proliferazione del melo e della moria del pero sono stati individuati in tutti i campioni di melo esaminati e nella gran parte dei campioni di pero rispettivamente. Tale studio costituisce la prima segnalazione di queste fitoplasmosi in Italia meridionale.
Parole chiave: Proliferazione del melo, Moria del pero, PCR, DNA ribosomiale.

SANTA OLGA CACCIOLA and ROBERTO FAEDDA
Istituto di Patologia vegetale, Università di Catania, via Valdisavoia 5, I-95123 Catania, Italy.

The development of a system for protoplast isolation from the mycelium of Phoma tracheiphila, using commercially available hydrolityc enzyme preparations, cellulase, lysing enzymes from both Trichoderma harzianum (Novozym 234) and Rhizoctonia solani, driselase and b -glucuronidase, is described. Factors affecting protoplast isolation and regeneration, including cultural conditions, age of the mycelium, lytic enzymes, incubation time in the enzyme mixture and osmotic stabilizers, were examined. The best results were obtained with cultures grown in static conditions on liquid medium, at 23±1 °C for 72h. Cellulase plus lysing enzymes from T. harzianum (1 mg ml^-1 of each enzyme) proved to be the most effective enzymatic mixture for protoplast release. Optimum incubation time in the enzymatic mixture was 2-4h. Three mineral salts, MgCl₂, MgSO₄ and KCl, were screened as osmotic stabilizers during protoplast release and maximum protoplast yields were obtained with 0.4 M and 0.6 M MgCl₂. Sucrose, KCl, MgCl₂ and MgSO₄ were used as osmotic stabilizers in the regeneration medium and the best results were obtained with 0.6M sucrose. High regeneration frequencies resulted also when the regeneration medium was stabilized with 0.6 M MgSO₄ while KCl and MgCl₂ were less effective. Protoplast yield varied depending on the strain of P. tracheiphila used. After the procedure was optimized, up to a maximum of 48.8x10⁶ protoplasts ml^-1 were produced from the mycelium. Viable fusion products were obtained by fusion of protoplasts from genetically marked strain in 30% PEG solution. Fusion frequency ranged from 1x10^-5 to 4x10^-6 viable protoplasts. The use of benomyl-resistance in combination with auxotrophic requirements as genetic markers allowed the selection of fusion products in crosses between auxotrophic mutants and fungicide-sensitive wild-type isolates. A high proportion of both conidia and protoplasts isolated from mycelium of fusion products were able to form prototrophic colonies on osmotically stabilized minimal medium. This would indicate that fusion products were not heterokaryotic since both conidia and protoplasts of P. tracheiphila were shown to be prevalently mononucleate.
Key words: Lytic enzymes, Osmotic stabilizers, Regeneration, Fusion, PEG.

Produzione e fusione di protoplasti di isolati di Phoma tracheiphila marcati geneticamente.

In questo studio è stato sviluppato un metodo per l’isolamento di protoplasti dal micelio di Phoma tracheiphila. Sono stati utilizzati preparati commerciali di enzimi idrolitici: cellulasi, enzimi litici di Trichoderma harzianum (Novozym 234) o di Rhizoctonia solani, driselasi e b -glucuronidasi. Sono stati esaminati i fattori che influenzano l’isolamento e la rigenerazione dei protoplasti, quali le condizioni di coltura, l’età del micelio, gli enzimi litici, la durata del periodo di incubazione nella miscela enzimatica e gli stabilizzanti osmotici. I migliori risultati sono stati ottenuti con colture statiche sviluppatesi su substrato liquido, a 23±1 °C per 72h, e con la miscela enzimatica contenente cellulasi ed enzimi litici di T. harzianum (1 mg ml^-1 di ciascun enzima). Nella fase di isolamento dei protoplasti dal micelio sono stati confrontati come stabilizzanti osmotici tre sali minerali: MgCl₂, MgSO₄ e KCl. Le produzioni più elevate di protoplasti sono state ottenute con MgCl₂ 0,4 M e 0,6 M. Quali stabilizzanti osmotici del substrato di rigenerazione sono stati confrontati saccarosio, KCl, MgCl₂e MgSO₄; i migliori risultati sono stati ottenuti con il saccarosio 0,6 M. Le percentuali di rigenerazione sono risultate elevate anche con MgSO₄ 0,6 M, mentre KCl e MgCl₂ sono apparsi meno efficaci. Il numero di protoplasti è variato anche in relazione all’isolato di P. tracheiphila utilizzato. In condizioni ottimali, sono stati prodotti sino ad un massimo di 48,8x106 protoplasti ml^-1. Mediante fusione in presenza di PEG (30%) sono stati ottenuti prodotti di fusione vitali tra protoplasti di ceppi marcati geneticamente. La frequenza dei prodotti di fusione è variata tra 1x10^-5 e 4x10^-6 protoplasti vitali. L’impiego sia dell’auxotrofia che della resistenza al benomyl come marcatori genetici ha reso possibile la selezione di prodotti di fusione ottenuti negli incroci tra mutanti auxotrofi e ceppi selvatici sensibili al benomyl. Una elevata percentuale di conidi e protoplasti isolati dal micelio dei prodotti di fusione ha dato origine a colonie prototrofiche su substrato minimo. Ciò sembrerebbe indicare che i prodotti di fusione non siano eterocariotici, poiché sia i conidi che i protoplasti di P. tracheiphila sono prevalentemente mononucleati.
Parole chiave: Enzimi litici, Stabilizzanti osmotici, Rigenerazione, Fusione, PEG.

GENNARO CRISTINZIO e CATERINA IANNINI.
Istituto di Patologia Vegetale, Università di Napoli "Federico II", Via Università, 100, I-80055 Portici, Napoli.

Viene segnalata la presenza di Phytophthora cryptogea su piante di actinidia in provincia di Benevento. Tra 12 cultivar saggiate per resistenza a questo fungo, la più suscettibile è risultata la ‘Tere’ e la meno la ‘M56’. Vengono riportati i risultati ottenuti su 4 cultivar con una tecnica rapida di valutazione della resistenza, basata sulla misurazione della perdita di elettroliti causata dal filtrato colturale del fungo su tessuti fogliari.
Parole chiave: Phytophthora cryptogea, Actinidia, Cultivar, Elettroliti.

A report of Phytophthora cryptogea on kiwifruit in Southern Italy.

Phytophthora cryptogea Pethybr. et Laff., has been isolated from kiwifruit (Actinidia chinensis Plan.) plants in district of Benevento. Out of 12 cultivars tested for resistance to this fungus the most and the less susceptible were ‘Tere’ and ‘M56’, respectively.A method for a rapid evaluation of resistance, based on a measurement of the electrolytic loss caused by application of P. cryptogea culture flltrate on leaf tissue, is also reported.
Key words: Phytophthora cryptogea, Actinidia, Cultivars, Electrolytic loss.

ROBERTO BUONAURIO, ANNALISA POLVERARI e CURGONIO CAPPELLI.
Istituto di Patologia vegetale, Università di Perugia, Borgo XX Giugno, 74, I-06121 Perugia.

Vengono segnalati attacchi di Septoria lavandulae Desm. su lavanda in Umbria. Gli isolati di S. lavandulae sono risultati patogeni anche su spigo nardo nuovo ospite del micete. La malattia si è manifestata sulle foglie basali della lavanda con piccole tacche necrotiche. Nel tessuto necrotico e su entrambe le pagine fogliari erano presenti picnidi sub-globosi quasi interamente infossati. I picnidi contenevano conidi filiformi con 3-4 setti.
Parole chiave: Lavandula angustifolia, Lavandula dentata, Septoria lavandulae.

Septoria lavandulae attacks on lavender in Umbria.

Attacks of Septoria lavandulae Desm. on lavender (Lavandula angustifolia Mill.) are reported in Umbria (Italy). The isolates of S. lavandulae were pathogenic on Lavandula dentata L., a new host for this fungus. The disease caused small necrotic spots on lower leaves. Histological preparations of diseased leaves revealed the presence of sub-globose pycnidia (40-49 µm in diameter) immersed in the necrotic tissue and opened on the both leaf surfaces. Pycnidia contained hyaline, 3-4 septate, filiform conidia (22-36x1.5-1.7 µm).
Key words: Lavandula angustifolia, Lavandula dentata, Septoria lavandulae.

ERNESTO LAHOZ¹, ROSARIO NICOLETTI¹_,RENATO CONTILLO¹ and FRANCESCO RAIMO².
¹Istituto Sperimentale per il Tabacco, Via P. Vitiello, 66, I-84018 Scafati (SA);
²Istituto Sperimentale per il Tabacco, Sezione Operativa Periferica di Lecce, Via F. Calasso, 3 I-73100 Lecce.

Since 1992 unusual symptoms of crown and root rot were observed on Oriental tobacco plants from southern Italy (Salento). Fusarium solani was the most common fungal species isolated. No previous report from tobacco in Italy is known. The present paper gives details about the identification and characterization of the fungus and its pathogenic behaviour as tested.
Key words: Tobacco, Crown-root rot, Fusarium solani, Host range.

Fusarium solani associato al marciume radicale e del colletto del tabacco.

Dal 1992, sintomi insoliti di marciume radicale e del colletto sono stati osservati su piante di tabacco coltivate nel Salento. Gli isolamenti hanno evidenziato la presenza preponderante di Fusarium solani, precedentemente non segnalato su tabacco in Italia. Vengono fornite indicazioni sulle procedure di identificazione del patogeno e sul suo comportamento nei confronti di altre specie vegetali ospiti.
Parole chiave: Tabacco, Marciume radicale e del colletto, Fusarium solani, Gamma di piante ospiti.