SALVATORICA SERRA e MICHELE BORGO
Istituto Sperimentale per la Viticoltura, Viale XXVIII Aprile 26, I-31015 Conegliano (Treviso)

La dinamica di germinazione delle oospore di Plasmopara viticola, poste a svernare sulla superficie del terreno o interrate ed incubate a 20 °C o all’esterno, è stata studiata nel Veneto per un periodo di tre anni. Le oospore svernate in superficie, rispetto a quelle interrate, durante la fase di recettività della vite hanno germinato in percentuale più elevata e più rapidamente. La germinazione delle oospore incubate all’esterno, in condizioni di umidità ottimali, è cominciata quando la temperatura media si è avvicinata a 10 °C. Le basse temperature e l’elevata piovosità hanno favorito la maturazione e la germinazione delle oospore; l’importanza della pioggia risiede nella capacità a mantenere umido il terreno. Anche per l’instaurarsi delle infezioni primarie di peronospora il fattore climatico critico è risultato essere l’umidità del terreno più che la temperatura.
Parole chiave: Oospore, Svernamento, Peronospora, Plasmopara viticola, Vite.

Investigations on maturation and germination of Plasmopara viticola oospores overwintered in natural conditions.

The germination dynamics of Plasmopara viticola oospores, overwintered on the soil surface or buried and incubated at 20 °C or outdoors, has been studied in Venetia over three years. The oospores overwintered on soil surface germinated in higher percentages and more rapidly than the buried ones during the phase of vine receptivity. The germination of oospores incubated outdoors, in optimum moisture conditions, began when the average temperature approached 10°C. Low temperatures and abundant rainfall favoured oospore maturation and germination. Rainfall was important for its ability to keep the soil wet. Also development of downy mildew primary infections seems to be affected by soil moisture more than by temperature.
Key words: Oospores, Overwintering, Downy mildew, Plasmopara viticola, Grapevine.

GIORGIO TERRANOVA, ANGELO CARUSO e ANGELO STARRANTINO.
Istituto Sperimentale per l’Agrumicoltura, Corso Savoia 190, I-95024 Acireale (Catania)

La selezione clonale condotta negli anni dall’Istituto Sperimentale per l’Agrumicoltura ha portato all’individuazione, tra l’altro, di numerosi cloni di ‘Tarocco’ che si distinguono per le caratteristiche produttive e qualitative e la differente epoca di maturazione del frutto. Nella presente nota si riferisce sullo stato sanitario dei cloni selezionati in campo e dei corrispettivi risanati mediante il microinnesto e la coltura in vitro di ovuli non sviluppati prelevati da frutti maturi riportando i risultati dei saggi biologico, sierologico (DAS-ELISA) ed elettroforetico (dPAGE). I cloni di origine selezionati in campo sono risultati affetti dalle seguenti malattie da virus e viroidi: psorosi A, exocortite, cachessia-xiloporosi e da altri viroidi a basso peso molecolare. I saggi effettuati sulle piantine ottenute attraverso le due tecniche di risanamento hanno confermato che la maggior parte dei cloni sono stati liberati dalle malattie da virus e viroidi che erano state precedentemente diagnosticate.
Parole chiave: Saggio biologico, dPAGE, DAS-ELISA, Risanamento, Arancio, Citrus sinensis, Microinnesto, Ovuli non sviluppati.

Sanitary status and sanitation of 18 clones of ‘Tarocco’ sweet orange.

Clonal selection carried out for several years at Istituto Sperimentale per l’Agrumicoltura led to the detection, among the others, of several clones of ‘Tarocco’ which are distinguishable for their productive and qualitative characteristics and for the different fruit ripening period. In this paper we report on the sanitary status of the clones selected in the field and on the same ones sanitated through micro-grafting and in vitro culture of undeveloped ovules collected from ripe fruits, showing the results of biological, sierologic (DAS-ELISA) and electrophoretic assays (dPAGE). The original clones, selected in the field, turned out to be affected by the following virus and viroids diseases: Psorosis A, Exocortis, Cachexia-xyloporosis, and other low molecular weight viroids. The assays made on the plantlets obtained through the two sanitation techniques confirmed that most of the clones were no more infected with the diseases previously detected.
Key words: Biological assay, dPAGE, DAS-ELISA, Sweet orange, Citrus sinensis, Micrografting, Undeveloped ovules.

CARMINE MARCONE¹, ANTONIO RAGOZZINO¹, GIUSEPPE FIRRAO² and ROMANO LOCCI^2
1Istituto di Patologia Vegetale dell’Università, Via Università, 100, I-80055 Portici (Napoli).
²Dipartimento di Biologia Applicata alla Difesa delle Piante, dell’Università, Via delle Scienze, 208, I-33100 Udine.

Diseased plants of lettuce, cv. Carioca growing at Pontecagnano, a typical vegetable growing area in southern Italy, showed reddening, stunting, thickening and distortion of basal leaves, intense phloem necrosis and failure to head. About 20% of plants were affected in the fields. The MLOs were detected by fluorescence and electron microscopy and PCR amplification of a 16S rRNA gene fragment. They were characterized by AluI restriction endonuclease digestion and RFLP analysis. Electron microscopy revealed a high polymorphism and titer of MLOs. Callose was thickly deposited in sieve tubes containing MLOs, and collapsed sieve elements were scattered through the phloem in several diseased samples. RFLP analysis revealed a restriction profile typical of the aster yellows MLO group.
Key words: Mycoplasma-like organisms, MLO detection, Ribosomal DNA, Aster yellows.

Individuazione e caratterizzazione molecolare di organismi del tipo dei micoplasmi (MLO) in lattuga in Campania.

Piante di lattuga, cv. Carioca, rinvenute a Pontecagnano, tipica area ortiva dell’Italia meridionale, manifestavano sintomi di arrossamento, nanismo, ispessimento e distorsione delle foglie basali, intensa necrosi del tessuto floematico in particolare dell’ipocotile e incapacità a produrre il grumulo. La percentuale delle piante malate in campo era circa il 20%. Micoplasmi erano individuati mediante microscopia a fluorescenza ed elettronica e tramite la reazione a catena della polimerasi PCR. Essi erano caratterizzati mediante l’analisi del polimorfismo nella lunghezza dei frammenti di restrizione (RFLP) utilizzando l’enzima AluI. Le osservazioni al microscopio elettronico hanno rivelato un elevato polimorfismo e un’alta concentrazione di MLOs nei tessuti affetti. Deposizioni di callosio a livello delle placche cribrose e collassamento dei tubi cribrosi erano frequentemente riscontrati nei campioni malati. L’analisi di restrizione ha messo in evidenza un pattern tipico dell’aster yellows.
Parole chiave: Organismi dei tipi Micoplasmi, Diagnosi, DNA ribosomiale, Giallume dell’astro.

MARCO SCORTICHINI, FLAVIA GRAZIA TROPIANO and MARIA PIA ROSSI
Istituto Sperimentale per la Patologia Vegetale, Via C. G. Bertero, 22, I-00156 Roma

In order to determine what features shown by a freshly isolated Pseudomonas syringae pv. lachrymans (PSL) were retained and what changes had taken place when the bacterium was inoculated ten successive times through zucchini squash, cucumber (host plants), tobacco (nonhost plant) or continually transferred on the medium B of King et al. (KB), we continously assessed the following: (i) soluble whole-cell protein profiles by means of SDS-PAGE; (ii) carbohydrate utilization by using the API 50 CH system; (iii) virulence by means of artificial inoculation. Continual alternation through host and nonhost plants as well as reinoculation through the plants (host and nonhost) after several transfers on KB were also carried out and the characteristics of the pathogen assessed in the same way. Both protein profiles and carbohydrate utilization varied according to the different environments in which the bacterium had lived. The protein profiles of PSL continually passed through host plants were similar to one another and different from those showed when the isolate was passed through nonhost plants or when it was transferred on KB. The last two groups of profiles were very similar. The continual alternation of PSL through host and nonhost plants induced a profile much more similar to that characterizing PSL grown only in nonhost plants or on KB. Some protein bands between 31 and 45 kDa revealed such a variability. Carbohydrate utilization assessment of PSL repeteadly passed through zucchini squash pointed out differences in the utilization of some sugars compared to the bacterium freshly isolated from the field. The continual transfers on the culture medium yielded a different capability of utilization compared to that obtained when PSL was successively inoculated through host and nonhost plants. The capability of aesculin utilization disappeared after serial transfers on KB as well as after the passages through nonhost plant. Finally, the repeated transfers on KB as well as the passages through nonhost plant reduced the virulence of the isolate, whereas many passages through host plants did not increase it. With respect to the characterization of an isolate, the influence of the artificial conditions of growth imposed on a microorganism is discussed.
Key words: Pseudomonas syringae pv. lachrymans, Protein profiles, Carbohydrate utilization, Characterization of bacterial isolates.

IPPOLITO CAMELE¹, GIAN LUIGI RANA¹, ANGELO DE STRADIS² e MICHELE PALUMBO^1
1Dipartimento di Biologia, Difesa e Biotecnologie Agro-Forestali, Università degli Studi della Basilicata, Via Nazario Sauro, 85, I-85100 Potenza;
²Centro di Servizi interdipartimentali di Microscopia, Università degli Studi della Basilicata, Via Nazario Sauro, 85, I-85100 Potenza.

Vengono segnalate nuove, consistenti infezioni del virus della bronzatura del pomodoro (TSWV) sull’omonima solanacea e su peperone in alcune aree orticole della Basilicata [Lavello (PZ), Montescaglioso, Metaponto e Scanzano (MT)] e della Puglia (Polignano, BA). La percentuale delle piante colpite è variata dal 10 al 50% nei campi di pomodoro e di peperone ed ha raggiunto l’80% su pomodoro in una serra ubicata in agro di Metaponto. Il virus è stato identificato sulla base della morfologia delle sue particelle, delle reazioni sintomatologiche di alcuni ospiti erbacei nonché dei risultati di saggi di immunodiffusione in gel di agarosio ed immunomicroscopia elettronica seguita da decorazione, effettuati utilizzando un antisiero policlonale ad un isolato di TSWV da lattuga.
Parole chiave: TSWV, Pomodoro, Peperone.

New epidemics of tomato spotted wilt virus (TSWV) in Basilicata and Apulia.

New severe outbreaks of tomato spotted wilt virus (TSWV) were observed in tomato and pepper crops in some horticultural areas of southern Italy (Basilicata and Apulia). The percentage of infected plants in tomato and pepper fields varied from 10 to 50% while it reached 80% in a tomato greenhouse located in the Metapontum area. The virus was identified on the basis of particle morphology, symptomatological reactions of some herbaceous hosts and of results obtained by immunodiffusion in agarose gel and immunosorbent electron microscopy followed by decoration, using a polyclonal antiserum to a lettuce isolate of TSWV.
Key words: TSWV, Tomato, Pepper.

CARMINE MARCONE¹, ANTONIO RAGOZZINO¹, GIUSEPPE FIRRAO² and ROMANO LOCCI².
¹Istituto di Patologia Vegetale, Università, Via Università, 100, I-80055 Portici (Napoli);
²Dipartimento di Biologia Applicata alla Difesa delle Piante, Università, Via delle Scienze, 208, I-33100 Udine.

Declining apricot trees belonging to several cultivars were found in seven different apricot orchards located in Campania region (southern Italy). Diseased trees showed symptoms of leaf rolling, interveinal chlorosis, premature growth, proliferation of buds and slender shoots with short internodes, phloem necrosis and dieback. Enlargement and vein clearing of the leaves are also present in the fall. Infected trees can be easily recognized in winter by their off-season growth. MLOs were found in such plants but not in healthy controls. The MLOs were detected by fluorescence and electron microscopy (TEM and SEM) and PCR amplification of a 16S rRNA gene fragment. They were characterized by RFLP analysis using AluI restriction endonuclease. The restriction profile of MLOs recovered from affected apricot trees was similar to that of apple proliferation agent.
Key words: Apricot chlorotic leaf roll, Decline, Ribosomal DNA, MLOs, Phytoplasmas, PCR.

Indagini su un deperimento dell’albicocco associato a organismi del tipo dei micoplasmi (MLOs).

Alberi di albicocco in fase di deperimento, appartenenti a diverse cultivar, sono stati individuati in sette differenti frutteti nella regione Campania (Italia meridionale). Gli alberi malati mostravano sintomi di accartocciamento fogliare, clorosi internervale, anticipo dell’entrata in vegetazione, iperproduzione di gemme e di esili rametti con internodi raccorciati, necrosi del floema e morte delle parti apicali delle branche che si estende gradualmente a quelle basali (dieback). Schiarimento e allargamento delle nervature fogliari sono evidenti in autunno. Gli alberi affetti sono facilmente riconoscibili durante l’inverno per la loro attività vegetativa fuori stagione. Organismi del tipo dei micoplasmi (MLOs) sono stati individuati in queste piante ma non nel controllo sano. Gli MLOs sono stati individuati mediante microscopia a fluorescenza ed elettronica (TEM e SEM) e mediante la reazione a catena della polimerasi (PCR). Essi sono stati inoltre caratterizzati mediante l’analisi del polimorfismo della lunghezza dei frammenti di restrizione (RFLP) utilizzando l’enzima AluI. L’analisi di restrizione ha evidenziato un pattern simile a quello dell’agente della proliferazione del melo.
Parole chiave: Accartocciamento fogliare clorotico, Deperimento, DNA ribosomiale, MLOs, Fitoplasmi, PCR.

FRANCO CICCARESE, MARIO AMENDUNI, GIOVANNI MICHELE VENA e MATTEO CIRULLI.
Dipartimento di Patologia vegetale, Università degli Studi di Bari, Via G. Amendola, 165/A, I-70126 Bari.

Prove di lotta chimica e biologica contro la septoriosi del sedano sono state condotte in serra ed in pieno campo. In serra, in condizioni ottimali (temperatura 20 °C, umidità relativa prossima alla saturazione) per le infezioni di Septoria apiicola, è stata valutata l’efficacia di trattamenti con Anilazina, Chlorothalonil, Fentin acetato e con un isolato di Trichoderma harzianum in relazione all’epoca d’intervento rispetto all’inoculazione artificiale del parassita. In pieno campo è stata verificata l’attività di contenimento di infezioni naturali di S. apiicola esercitata da trattamenti settimanali con lo stesso isolato di T. harzianum e con Anilazina e Chlorothalonil. In generale gli anticrittogamici saggiati, e sopratutto l’Anilazina, sono apparsi molto efficaci nel contenimento della septoriosi. Nella prova in serra i risultati migliori sono stati ottenuti con trattamenti effettuati 5 giorni prima e 1 giorno dopo l’inoculazione di S. apiicola; i trattamenti effettuati 3 giorni dopo l’inoculazione del parassita sono risultati parzialmente efficaci; quelli fatti 5 giorni dopo l’inoculazione non hanno avuto alcun effetto. I risultati di serra e di pieno campo hanno dimostrato che T. harzianum esercita attività di parziale contenimento della septoriosi; tuttavia l’antagonista ha manifestato la sua attività nelle applicazioni a calendario ed in quelle effettuate 5 giorni prima dell’inoculazione del parassita, mentre non ha influito sulla malattia quando le applicazioni stesse sono state fatte dopo l’inoculazione di S. apiicola.
Parole chiave: Sedano, Septoria apiicola, Lotta chimica e biologica.

Chemical and biological control trials against Septoria leaf spot of celery.

Greenhouse and field tests for chemical and biological control of Septoria leaf spot of celery were carried out. Efficacy of Anilazine, Chlorothalonil, Fentin acetate, and a isolate of Trichoderma harzianum Rifai applied at different time in respect to artificial inoculation of Septoria apiicola were tested in the greenhouse under optimal conditions for pathogen infections (temp. 20 °C, nearly saturated R.H.). In the field, under natural infections of S. apiicola, the control activity of weekly treatments with the T. harzianum isolate, Anilazine and Chlorothalonil was tested. In both testes fungicides, especially Anilazine, showed a very good control. Moreover, in the greenhouse test the best results were obtained when sprays were applied five days before or one day after inoculation with S. apiicola. Chemical treatments applied three days after inoculation were less effective, whereas those applied five days after inoculation were ineffective. In greenhouse and field tests T. harzianum proved to partially control Septoria leaf spot. However, biocontrol of the disease occurred when the antagonist was applied weekly or five days before the inoculation of the pathogen, whereas no disease control was obtained when T. harzianum was applied after inoculation with S. apiicola.
Key words: Celery, Septoria apiicola, Chemical and biological control.

PAOLA DEL SERRONE¹, CLAUDIA MINUCCI², MARINA BARBA¹, MAURIZIO CONTI² e GUIDO BOCCARDO².
¹Istituto Sperimentale per la Patologia Vegetale, Via Bertero 22, I-00156 Roma;
²Istituto Fitovirologia Applicata, CNR, Via delle Cacce 73, I-10136 Torino.

Il presente lavoro riferisce sui risultati ottenuti utilizzando l’ibridazione molecolare su supporto solido (dot and slot blot hybridization) e la reazione di amplificazione genomica a catena (PCR) per la diagnosi di fitoplasmi in viti ed in piante di vinca [Catharanthus roseus (L.) G. Don]. DNA in estratti grezzi o purificati da tessuto fogliare sono stati ibridati con una sonda molecolare (EAY352) radioattiva costruita a partire da frammenti di DNA del genoma di European aster yellows-MLO. I DNA purificati a partire dagli stessi campioni sono stati, inoltre, amplificati utilizzando iniziatori di reazione disegnati a partire dalle sequenze nucleotidiche della sonda EAY 352 o 16S rDNA di fitoplasmi. Le prove d’ibridazione molecolare e di PCR hanno evidenziato la presenza di fitoplasmi geneticamente correlati ad EAY-MLO nella quasi totalità dei campioni di vite e vinca infetti, usando sia DNA purificati sia estratti grezzi. La tecnica d’ibridazione molecolare, verificata in diagnosi di campo su un numero sufficientemente ampio di piante, ha dato risultati soddisfacenti.
Parole chiave: Vite, Fitoplasmi, Diagnosi molecolare.

Molecular diagnosis of phytoplasmas in grapevine.

Dot and slot-blot hybridization assays and polymerase chain reaction (PCR) were used for the diagnosis of mycoplasma-like organisms (= phytoplasmas) associated with grapevine plants showing yellows symptoms, reminescent of those of Flavéscence dorée. Both crude leaf sap and purified DNAs from leaves of infected grapevines and Catharanthus roseus, hybridized with EAY 352 probe cloned from a fragment of the European aster yellows (EAY) MLO genome which did not react with healthy samples. Purified DNAs were amplified by primers, designed either on the sequence of the 16S rDNA, or on the nucleotide sequence of the EAY 352 cloned insert. The former pair, combined with restriction fragment length polymorfism analysis, using AluI restriction enzyme, allowed to discriminate between the DNAs from healthy and infected grapevines. The latter pair specifically amplified fragment from DNA of infected but not of healthy grapevines. Dot-blot hybridization assays were effective in detecting MLOs DNA in the crude sap of grapevines screened in vineyards.
Key words: Phytoplasmas, Grapevine, Molecular diagnosis.

MARCELLO BIOCCA and EMMA MOTTA
Istituto Sperimentale per la Patologia Vegetale, Via C. G. Bertero, 22, I-00156 Roma.

The occurrence of Hypoxylon mediterraneum in bark and wood tissues of healthy and declining Turkey oak (Quercus cerris L.) trees was evaluated in three periods of 1993 in a stand near Rome. The fungus was never isolated from wood, whereas it was the principal component of bark mycoflora. The bark might be specifically colonized by the fungus during its latent phase. Similar results were obtained from both healthy and declining trees. A list of the mycoflora isolated from bark and wood is also given.
Key words: Hypoxylon mediterraneum, Latency, Quercus cerris, Oak decline.

Aspetti della latenza di Hypoxylon mediterraneum in cerri deperienti.

In un bosco nei pressi di Roma, è stata considerata la presenza di Hypoxylon mediterraneum (De Not.) J. Miller. nella corteccia e nel legno di alberi di cerro (Quercus cerris L.) sani e con sintomi di deperimento, in tre periodi del 1993. H. mediterraneum non è mai stato isolato dal legno, mentre rappresenta la componente principale della micoflora della corteccia, che risulta essere, quindi, un tessuto colonizzato specificatamente dal fungo durante la sua fase latente. Tale situazione è riscontrabile sulle piante sane come su quelle deperienti. Viene fornita una lista della micoflora isolata.
Parole chiave: Hypoxylon mediterraneum, Latenza, Quercus cerris, Deperimento.

DUCCIO R.L. CACCIONI¹, STANLEY G. DEANS² and GIUSEPPE RUBERTO³.
¹CRIOF, University of Bologna, Via F. Re, 8, I-40100 Bologna;
²Department of Biochemical Sciences, Scottish Agricultural College, Auchincruive, Ayr, KA6 5HW (Scotland, UK);
³CNR, Istituto per lo Studio delle Sostanze Naturali, Via del Santuario, 110, I-95028 Valverde (Catania).

Essential oils, which are present in the flavedo of citrus fruits in high quantities, can exert an important bioregulatory action on the fungal spores of the two most dangerous post-harvest pathogens of citrus fruit, namely Penicillium digitatum (Pers.) Sacc. and Penicillium italicum Wehm. As a part of a screening survey aimed at investigating the bioregulatory action of citrus fruit essential oils, an in vitro study was conducted to determine the activity of citrus fruit essential oil components (nonanal, citral, alpha-pinene, myrcene, alpha-phellandrene and d-limonene) on the germination of P. digitatum and P. italicum spores. The tests were carried out by adding a number of amounts (1000, 500, 132 250, 125 ppm) of the various compounds to sucrose agar. The most active compound, in relation to the method and to the fungal strains employed, was found to be citral which, at doses of 250 ppm, proved capable of exerting a fungistatic action on both pathogens.
Key words: Citrus fruit, Essential oil, Antifungal property, Citrus fruit pathogens, Penicillium italicum, Penicillium digitatum.

Azione di inibizione di Penicillium italicum e P. digitatum da parte di componenti degli olii essenziali di agrume.

Gli olii essenziali, presenti nel flavedo degli agrumi in elevate quantità, possono esercitare una importante azione di bioregolazione nei confronti delle spore dei due più importanti patogeni post-raccolta degli agrumi: Penicillium digitatum (Pers.) Sacc. e Penicillium italicum. Nell’ambito di indagini riguardo le azioni di bioregolazione esercitate, dagli olii essenziali di agrume è stato condotto uno studio per determinare l’attività di componenti degli olii essenziali (nonanal, citral, alpha-pinene, mircene, alpha-fellandrene e d-limonene) sulla germinazione delle spore di P. digitatum e P. italicum. Le prove sono state effettuate addizionando differenti quantitativi dei composti (1000, 500, 250, 125 ppm) ad agar-saccarosio. I controlli sono stati effettuati dopo 24, 48 e 72 ore di incubazione a 20 °C. In relazione al metodo e ai ceppi fungini utilizzati il composto più attivo è risultato citral, che a dosi di 250 ppm ha esercitato una azione fungistatica verso entrambi i patogeni.
Parole chiave: Agrumi, Olii essenziali, Proprietà antifungine, Parassiti di agrumi, Penicillium digitatum, Penicillium italicum.

VITTORIO MARIO STRAVATO¹, ROBERTO BUONAURIO² and CURGONIO CAPPELLI².
¹Peto Italiana, Centro Ricerche di Latina, I-04010 Borgo Sabotino (Latina);
²Istituto di Patologia Vegetale, Facoltà di Agraria, Via Borgo XX Giugno, 74, I-06100 Perugia.

Stemphylium herbarum causing leaf spot on red cichory (Cichorium intybus L.) is reported in Italy. This is the first report of this fungus attacks on red cichory.
Key words: Stemphylium herbarum, Red cichory, Cichorium intybus.

Attacchi di Stemphylium herbarum Simmonds su radicchio rosso in Italia.

Viene segnalata in Italia la presenza di tacche fogliari su radicchio rosso (Cichorium intybus L.) causate da Stemphylium herbarum. Questa è la prima segnalazione di attacchi del fungo su radicchio rosso.
Parole chiave: Stemphylium herbarum, Radicchio rosso, Cichorium intybus.